Procédure FACS Aria
Démarrage :
1 Mise sous tension de l’appareil :
1.1 Contrôler le niveau des bidons
1.2 Ouvrir le capot de facade pour neutraliser le laser
1.3 Appuyer sur le bouton ON (côté gauche de l’appareil) en ayant pris soin de mettre sur ON les lasers qui vont être utilisés.
2 Mise sous tension de l’informatique (le bouton est sur la face avant de l’ordinateur et il n’y a pas de mot de passe).
3 Mise en place de la buse de travail (regarder le cahier de manip pour avoir le N° de la buse valide).
3.1 Ouvrir la protection des plaques de déflection en appuyant un peu et en tournant la vis dans le sens inverse des aiguilles d’une montre.
3.2 Retirer la buse de ‘stockage’ :
3.2.1 Ouvrir
le petit verrou en le tournant
(si on ressent une petite résistance lors de la rotation, il peut y avoir du tampon qui a coulé dans son emplacement, dans ce cas le retirer en le tournant dans le sens des aiguilles d'une montre jusqu'en butée et le tirer vers l'avant, puis nettoyer son emplacement avec de l'eau distillée, bien sêcher et le remettre en place en effectuant la procédure inverse).
3.2.2 Tirer sur la buse avec un mouvement circulaire vers le haut pour abaisser l’avant de la buse et ainsi éviter de laisser le micro joint dans la chambre d’analyse.
Si le joint est resté dans la chambre d’analyse, le récupérer au moyen d’un petit cône de pipette.
3.3 Récupérer le joint sur la buse de ‘stockage’ et l’installer sur la buse de travail au moyen d’un petit cône de pipette en l’installant dans la gorge prévue à cette effet sur le côté or de la buse.
3.4 Mettre en place la buse avec un mouvement circulaire pour que la buse ait l’avant (côté doré vers l’avant et en haut) plus bas que le côté arrière. Appuyer du haut vers le bas sur la partie qui reste à l’extérieur pour bien plaquer le joint.
3.4.1 Vérifier au moyen de la loupe que le joint est bien en place (le joint doit apparaître distinctement et laisser voir en son centre l’orifice de la chambre d’analyse) sinon retirer la buse et la remettre (revenir au point 3.2).
3.4.2 Verrouiller la buse au moyen du petit verrou en le remettant en position verticale.
4 Démarrer le logiciel BD FACSDiva en double cliquant sur son icône (FACSDiva software) sur le bureau
4.2 Attendre quelques minutes pour que le logiciel se connecte à la machine : en bas de la fenêtre instrument, cela doit être indiqué : ‘Instrument connected’. Si c’est le cas passer en 5
4.3 Si l’instrument n’est pas connecté, quitter le programme et le relancer (reprendre en 4) si le problème persiste éteindre l’informatique et le FACSAria et tout redémarrer une minute après.
5 Dans le menu ‘Instrument’, sous-menu ‘Cleaning mode’, choisissez ‘Prime after tank refill...’ et sélectionnez tous les fluides afin de purger la fluidique des bulles qui auraient pu y rester
6 Purger les filtres en tournant la vis du filtre dans le sens inverse des aiguilles d’une montre
Astuce
: Pour éviter de faire couler du liquide, vous pouvez
utiliser une seringue que vous insérez dans le petit trou du
bouchon et que vous faites tourner dans le sens inverse des aiguilles
d'une montre pour purger le filtre. Il suffit d'aspirer avec la
seringue et de refermer le filtre en tournant la seringue dans le sens
contraire du précédent.
7 Lancer un nettoyage fluidique : aller dans le menu ‘Instrument’, sous-menu ‘Cleaning mode’, choisir ‘Long clean with ethanol’
9 Une fenêtre apparaît indiquant « Fluidic startup complete, the system is ready », cliquer sur OK
Astuce : Pour éviter la présence de bulles lors du démarrage fluidique, mettez un tube d'eau distillée sur le passeur d'échantillon et lancez, dans le menu 'Instrumen', sous-menu 'Cleaning mode', l'option 'Clean Flow Cell' et ensuite suivez la procédure.
10.1 Tout en regardant s’il n’y a pas de fuite au niveau de la chambre d’analyse, cliquer sur ‘Stream’. Au moindre soucis, fuite, jet en biais ou autre, cliquer immédiatement sur ‘Stream’ pour arrêter le jet. Dans ce cas, démonter la buse et refaire l’étape 3 après nettoyage de celle-ci (ultrasons 2 minutes avec contrôle au microscope) puis revenir en 10.
10.2 Vérifier la stabilité du jet plusieurs cas de figure :
10.2.1 En présence d’une bulle même toute petite, arrêter la fluidique en cliquant sur ‘Stream’ et recommencer en 10 sinon passer à l’étape suivante
10.2.2 Si le jet est stable au niveau de l’écran et que les gouttes se forment régulièrement passer en 10.3
10.2.3 Si le jet est instable ou que les gouttelettes ne se forment pas régulièrement arrêter la fluidique en cliquant sur ‘Stream’ et recommencer en 10, si cette étape a déjà été effectuée passez en 10.2.4
10.2.4 Lancer un nettoyage fluidique : coupez le jet en cliquant sur ‘Stream’, puis allez dans le menu ‘Instrument’, sous-menu ‘Cleaning mode’, choisissez ‘Long clean with bleach’ (durée 7 minutes environ). Après cela, retournez en 8. Si cela a déjà été effectué, démontez la buse pour la soniquer et retournez en 3.
10.3 Choisir la pression de travail dans le menu ‘Sort’, sous-menu ‘Sort setup’. Avec les buses de 70 microns, seules les pressions ‘High’ (70PSI) et ‘Medium’ (35PSI) peuvent être utilisées.
10.4 Mise en place du système de tri :
10.4.1 Arrêter la fluidique en cliquant sur ‘Stream’
10.4.3 Mettre en place la plaque de charge, le côté proéminent vers le fond
10.4.4 Connecter délicatement le fil de charge sur la buse.
10.4.5 Redémarrer la fluidique en cliquant sur ‘Stream’
10.4.6 S’il n’y a pas de bulle passer en 10.5
10.4.7 En présence de bulle, arrêter la fluidique en cliquant sur ‘Stream’ puis repasser en 10.4.5.
10.5 Activer la stabilisation du point de rupture du jet en
cliquant sur ‘Sweet spot’. La valeur du ‘Gap’ doit être autours de 5. Entrer
10.6 Si le jet est légèrement décalé par rapport à la poubelle, recentrer le système en utilisant le tournevis et en déserrant les 2 boulons du support. Si cela ne suffit pas c’est que la buse n’est pas propre et dans ce cas retourner en 10.2.4.
10.7 Fermer la protection des plaques de déflection en appuyant un peu la protection et en tournant la vis dans le sens des aiguilles d’une montre.
10.8 Vérifier la qualité des jets déviés en cliquant sur
voltage pour charger les plaques et ensuite sur test pour simuler un tri 4
voies.
Il doit y avoir spots au niveau de la fenêtre de contrôle : la poubelle au centre et 2 jets latéraux de chaque côté. Le tout ne doit pas se déplacer (ou très peu) lors de la mise sous tension. Si le déplacement est trop grand et ne peut être corrigé au moyen du réglage, repasser en 10.2.4 pour nettoyer la buse.
11 Réglage du ‘drop-delay’.
11.1 Fermer le capot de facade avant pour ré-activer le laser
11.2 Ouvrir le dossier Administrator de
11.3 Ouvrir le dossier Réglage
11.4 Double cliquer sur le fichier ‘Drop delay’
11.5 Prendre les billes ‘Accudrop’ dans le frigo, les vortexer
11.6 mettre en place le tube de billes sur l’appareil
11.7 Vérifier que le Flow rate soit sur 3.0 (Fenêtre Acquisition control) pour éviter que l’échantillon ne passe trop vite.
11.8 Lancer le passage des billes en cliquant sur ‘Load’
11.9 Vérifier que dans ‘Acquisition status’ le ‘Threshold rate’ soit compris entre 2 et 3000 par seconde. Pour ajuster à ces valeurs, moduler le ‘Flow rate’.
11.10 Double cliquer sur ‘Tube_001’ dans le browser et ensuite sur ‘Sort_Layout_001’ pour faire apparaître la fenêtre ‘Sort_Layout’.
11.12 Cliquer sur ‘Sort’ pour lancer le tri.
11.13 Cliquer sur ‘Cancel’ pour laisser les billes aller dans la poubelle même si elles sont triées.
11.14 Cliquer sur ‘Voltage’ pour charger les plaques. A ce moment, un spot doit apparaître à gauche du spot déjà présent. Ce spot corresponds au jet dévié sur la gauche pour le tri.
11.15 Pour activer le système de calcul du drop-delay, cliquer sur ‘Optical Filter’. Deux quadrants apparaissent, indiquant le pourcentage de billes dans chacun des jets. Quand le voltage est coupé, le quadrant de droite doit indiquer 100%.
11.16 Jouer sur la valeur du ‘Drop delay’ pour que le quadrant de gauche soit quasiment à 100 %. Il faut attendre 5 secondes après avoir introduit une nouvelle valeur de drop delay pour que les quadrants soient stabilisés.
11.17 Quand le quadrant de gauche est a quasiment 100 % passer la précision à ‘Fine tune’ et jouer sur la valeur du ‘Drop delay’ pour avoir une valeur maximum (l’idéal étant d’avoir plus de 95%).
11.18 Quand l’objectif est réalisé, passer le mode précision en 16-16-0. le quadrant de gauche doit être à quasiment 100 %. Le drop delay est réglé.
11.19 Arrêter de passer l’échantillon en cliquant sur ‘Unload’
11.20 Quitter le mode de réglage en allant sélectionner le protocole pour le tri du jour.
