TAMPON HEPES (pour 1L)

137mM NaCl (8g)

5mM KCl (0,373g),

1mM Na2HPO4 (0,120g),

5mM glucose (0,901g),

1mM CaCl2 (0,111g),

0,5mM MgCl2 (0,048g)

BSA 1g/l,

Hepes 10mM (2,383g),

pH 7,4.

 
PROTOCOLE:

Centrifuger les cellules (1400 t/min 5 min).

Les cellules (à 107 cellules par ml) sont incubées 20 minutes (37° au bain marie) dans du Hanks contenant le Fluo 3 à la concentration finale de 4µM (diluer la solution stock 100 fois par du Hanks).

Les cellules sont ensuite diluées au 1/5 par du Hanks contenant 1% de sérum de veau foetal et incubées pour 40 minutes à 37° au bain marie.

Les cellules sont alors lavées 3 fois et resuspendues à 106/ml dans le tampon Hepes.

Avant chaque test, les laisser 10min à 37°.

COMMENTAIRE:

Cette technique peut être précédée d'un marquage membranaire en immunofluorescence (PE et/ou TriColor).